使用 K2® 转染系统转染 A7 视网膜星形胶质细胞 | Biontex - Biontex CN

来自 : 发布时间：2024-05-05

主页/ 应用简报：A7 视网膜星形胶质细胞的转染应用简报：A7 视网膜星形胶质细胞的转染使用 K2® 转染系统转染星形胶质细胞

本应用简报介绍了使用 gWiz™GFP（绿色荧光蛋白）报告基因质粒转染 A7 视网膜星形胶质细胞K2® 转染系统作为载体。 48小时后，转染效率高达40%，细胞活力为70%至90%。

使用K2®转染试剂转染永生化视网膜细胞系 - 简要报告

Ding Wen (Roger) Chen 和 Marianna Foldvari 药学院和滑铁卢纳米技术研究所，滑铁卢大学，滑铁卢，ON，加拿大 N2L 3G1

最初目的实验：

通过评估转染效率和毒性，确定转染不同群体的A7视网膜星形胶质细胞的最佳K2®配方。48 小时。

材料：

K2® 转染系统（K2® 试剂 + K2® 倍增器）（Cat#T060，Biontex，德国）gWiz™ GFP（绿色）荧光蛋白）报告质粒（Aldevron，Fargo，ND，美国）A7 大鼠星形胶质细胞 [1,2]DMEM/高葡萄糖培养基（补充有 10% 胎牛血清和 1% 青霉素链霉素）（Thermo Fisher Scientific Waltham，MA，USA） )TrypLE Express 试剂 (Thermo Fisher Scientific)12 或 24 孔组织培养处理板 (MatTek Corporation, Ashland, MA, USA)MitoTracker® Deep Red FM (Thermo Fisher Scientific)CellMask™ Deep Red 血浆膜染料 (Thermo Fisher Scientific)科学）

方法：

A7大鼠星形胶质细胞是永生化星形胶质细胞系，采用添加有10%胎牛血清和1%青霉素/链霉素的DMEM/高糖培养基培养（完全培养基）放入 T75 细胞培养处理的烧瓶中，直至 70% 汇合。使用 TrypLE Express 对细胞进行胰蛋白酶消化，并将适当数量的细胞（25,000、50,000 或 100,000 个细胞）接种于到 12 孔（对于 50,000 和 100,000 个细胞接种密度）或 24 孔（对于 25,000 个细胞接种密度）组织培养处理板的每个孔中补充有 1mL 完全培养基。转染前将板在 37°C 培养箱中用 5% CO2 孵育过夜。转染前两小时，将 3.75 µL K2 Multiplier 直接添加到含有细胞的每个孔中，并将板在 37°C 下孵育。同时，根据制造商的方案制备K2转染颗粒。具体用量见表1。K2 Multiplier孵育2小时后，将制备好的K2转染颗粒加入到每孔中，37℃孵育48小时。不同配方和接种密度之间的具体剂量体积有所不同，如表 1 所示。转染 48 小时后，使用 TrypLe™ Express 对细胞进行胰蛋白酶消化，并在流动前用 1mL 1μM MitoTracker® Deep Red 在 37°C 下染色 30 分钟细胞计数评估。根据 GFP 表达确定转染效率，并根据 MitoTracker® 荧光发射评估活力。

表 1 – 不同 K2 制剂的组成

结果：

图1 – 两种不同配方比例的K2®转染试剂转染A7视网膜星形胶质细胞48小时后的转染效率比较。

图2 – 两种不同配方比例的K2®转染试剂转染A7视网膜星形胶质细胞48小时后活力比较。

图 3 – 用 K2® 转染试剂（配方 2）转染 48 年后 A7 星形胶质细胞的共焦显微图像小时。绿色代表 GFP 表达，红色代表用 CellMask™ 深红色质膜染料染色的细胞膜。

结论：

K2®转染系统已被证明可有效转染A7细胞，目前已用于下游实验。

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参考文献

[1] H.M. Geller，M. Dubois-Dalcq，通过逆转录病毒载体永生化的大鼠中枢神经系统衍生细胞系的抗原和功能表征。 J 细胞生物学。 107 (1988) 1977-1986。

[2] M. Noble, K. Murray，纯化的星形胶质细胞促进双能神经胶质祖细胞的体外分裂。 EMBO J. 3 (1984) 2243-2247.[3] Chen DW 和 Foldvari M.，筛选用于青光眼治疗的非病毒神经营养因子基因传递系统的体外生物测定模型。药物递送。译。资源。 (2016) doi:10.1007/s13346-016-0324-9传真订购

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